{"id":588,"date":"2008-12-18T13:39:45","date_gmt":"2008-12-18T13:39:45","guid":{"rendered":""},"modified":"2021-07-10T20:35:51","modified_gmt":"2021-07-10T23:35:51","slug":"desenvolvimento_e_aplicacao_de_marcadores_microssatelites_em_macaranduba_manilkara_huberi","status":"publish","type":"post","link":"http:\/\/localhost\/biotecnologia\/artigos_de_biotecnologia\/desenvolvimento_e_aplicacao_de_marcadores_microssatelites_em_macaranduba_manilkara_huberi.html","title":{"rendered":"Desenvolvimento e Aplica\u00e7\u00e3o de Marcadores Microssat\u00e9lites em Ma\u00e7aranduba (Manilkara huberi)."},"content":{"rendered":"\n
\"ab\"\/<\/figure>\n\n\n\n

<\/span><\/div>\n\n\n\n

A Floresta Amaz\u00f4nica abriga uma enorme riqueza de ess\u00eancias florestais, al\u00e9m de suas propriedades madeireiras. Manilkara huberi (Ducke) Stand. (Sapotaceae), popularmente conhecida como ma\u00e7aranduba \u00e9 uma esp\u00e9cie amaz\u00f4nica madeireira intensamente explorada, cujas \u00e1rvores podem atingir at\u00e9 50m de altura. Ocorre na Amaz\u00f4nia Brasileira, do Par\u00e1 ao Amazonas, nas matas de terra firme e de v\u00e1rzeas pouco inund\u00e1veis; \u00e9 a maior, mais procurada e de mais ampla dispers\u00e3o das ma\u00e7arandubas amaz\u00f4nicas, fornecendo quase a totalidade da madeira exportada por Bel\u00e9m. Devido a essa explora\u00e7\u00e3o, estudos de an\u00e1lise gen\u00f4mica t\u00eam sido realizados, gerando informa\u00e7\u00f5es sobre a diversidade gen\u00e9tica existente, sendo de fundamental import\u00e2ncia na defini\u00e7\u00e3o de estrat\u00e9gias adequadas para o manejo e a conserva\u00e7\u00e3o de esp\u00e9cies nativas como a ma\u00e7aranduba.<\/p>\n\n\n\n

Para an\u00e1lises nesse n\u00edvel os marcadores microssat\u00e9lites, tamb\u00e9m denominados SSR (“Simple Sequence Repeats”), s\u00e3o uma ferramenta importante. Esses marcadores s\u00e3o formados por seq\u00fc\u00eancias de uma a seis bases de comprimento repetidas em “tandem” (Jacob et al., 1991), t\u00eam heran\u00e7a codominante, s\u00e3o multial\u00e9licos, s\u00e3o encontrados em alta freq\u00fc\u00eancia e com ampla distribui\u00e7\u00e3o nos genomas de eucariotos (T\u00f3th et al., 2000), apresentando o maior conte\u00fado informativo por loco g\u00eanico entre todas as classes de marcadores moleculares (Goldstein, 2001).<\/p>\n\n\n\n

Uma bateria de marcadores microssat\u00e9lites para Manilkara huberi foi desenvolvida para o estudo da diversidade gen\u00e9tica, do fluxo g\u00eanico e do sistema de cruzamento, de uma popula\u00e7\u00e3o mantida em um programa de manejo de corte florestal seletivo como parte do Projeto Dendrogene. O DNA total foi extra\u00eddo segundo o protocolo de CTAB 2% (Ferreira & Grattapaglia, 1995) a partir de material caulinar coletado em Santar\u00e9m \u2013 Amaz\u00f4nia Brasileira do Par\u00e1. A Enzima TSP 509 I foi a que gerou o perfil mais adequado de fragmentos para a constru\u00e7\u00e3o da biblioteca enriquecida.<\/p>\n\n\n\n

O processo de enriquecimento da biblioteca para elementos AG\/TC foi verificada com alta efici\u00eancia na presen\u00e7a de um n\u00famero alto de clones positivos com as seq\u00fc\u00eancias com dinucleot\u00eddeos repetidos nos fragmentos. Foram obtidos 271 clones positivos no processo de hibridiza\u00e7\u00e3o dos quais 251 foram sequenciados. Foram obtidos microssat\u00e9lites e seq\u00fc\u00eancias flanqueadoras apropriados para o desenho de \u201cprimers\u201d em 29 clones. Desses, sete n\u00e3o amplificaram e 22 amplificaram em temperaturas que variaram desde 52oC a 62oC. Verificou-se polimorfismo satisfat\u00f3rio em 14 \u201cprimers\u201d, cinco apresentaram monomorfismo, e tr\u00eas n\u00e3o amplificaram fragmentos n\u00edtidos. Os 12 locos mais polim\u00f3rficos (Tabela 1) foram selecionados para os estudos populacionais.<\/p>\n\n\n\n

Os marcadores desenvolvidos neste trabalho abrem nova perspectiva para o aprofundamento de estudos gen\u00e9ticos na esp\u00e9cie M. huberi e representam uma ferramenta poderosa para a gera\u00e7\u00e3o de dados gen\u00e9ticos populacionais fundamentais e indispens\u00e1veis \u00e0s atividades de coleta, conserva\u00e7\u00e3o in situ e ex situ.<\/p>\n\n\n\n

Entre os 12 locos selecionados, nove apresentaram heterozigosidade esperada maior que 80%. Esses resultados mostram que esses locos s\u00e3o ideais para estudos de diversidade gen\u00e9tica, fluxo g\u00eanico, sistemas de cruzamento e testes de paternidade. Por isso, esses locos SSRs, est\u00e3o sendo utilizados nos estudos gen\u00e9ticos de uma popula\u00e7\u00e3o de Manilkara huberi, para avaliar os impactos da explora\u00e7\u00e3o madeireira, em 500 hectares sob monitoramento em Santar\u00e9m-PA, como tamb\u00e9m para propor estrat\u00e9gias adequadas para o manejo desta esp\u00e9cie.<\/p>\n\n\n\n

Locos<\/strong><\/td>N\u00b0 de Repeti\u00e7\u00f5es<\/strong><\/td>Fragmento pb Verificado<\/strong><\/td>T(\u00b0C)<\/strong><\/td>N<\/strong><\/td>A<\/strong><\/td>He<\/strong><\/td>Ho<\/strong><\/td><\/tr><\/thead>
Mh 03<\/td>(CT)17<\/sub><\/td>176-204<\/td>56<\/td>12<\/td> 7<\/td>0,859<\/td>1,000<\/td><\/tr>
Mh 04<\/td>(CT)12<\/sub><\/td>189-209<\/td>52<\/td>12<\/td> 5<\/td>0,768<\/td>0,583<\/td><\/tr>
Mh 06<\/td>(GA)14<\/sub><\/td>162-188<\/td>56<\/td>12<\/td> 7<\/td>0,754<\/td>0,417<\/td><\/tr>
Mh 07<\/td>(CT)23<\/sub><\/td>153-187<\/td>56<\/td>12<\/td> 4<\/td>0,746<\/td>0,750<\/td><\/tr>
Mh 08<\/td>(CT)11<\/sub><\/td>172-202<\/td>56<\/td>12<\/td> 7<\/td>0,862<\/td>0,917<\/td><\/tr>
Mh 12<\/td>(CT)9<\/sub> (AC)6<\/sub><\/td>187-211<\/td>56<\/td>12<\/td> 7<\/td>0,859<\/td>0,667<\/td><\/tr>
Mh 17<\/td>(CT)13<\/sub><\/td>240-274<\/td>56<\/td>12<\/td> 6<\/td>0,721<\/td>0,750<\/td><\/tr>
Mh 19<\/td>(CT)21<\/sub><\/td>146-164<\/td>56<\/td>12<\/td>7<\/td>0,862<\/td>0,750<\/td><\/tr>
Mh 20<\/td>(GA)13<\/sub><\/td>134-166<\/td>56<\/td>12<\/td>8<\/td>0,848<\/td>0,833<\/td><\/tr>
Mh 22<\/td>(CT)15<\/sub><\/td>180-206<\/td>56<\/td>12<\/td>7<\/td>0,841<\/td>0,833<\/td><\/tr>
Mh 24<\/td>(CT)17<\/sub><\/td>181-209<\/td>60<\/td>12<\/td>7<\/td>0,815<\/td>0,167<\/td><\/tr>
Mh 26<\/td>(CT)14<\/sub><\/td>224-250<\/td>58<\/td>12<\/td>6<\/td>0,819<\/td>0,583<\/td><\/tr>
m\u00e9dia<\/td> <\/td> <\/td> <\/td> <\/td>6,43<\/td>0,813<\/td>0,688<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Refer\u00eancias bibliogr\u00e1ficas<\/strong><\/p>\n\n\n\n

FERREIRA, M.E. & GRATTAPAGLIA, D. Introdu\u00e7\u00e3o ao uso de marcadores moleculares em an\u00e1lise gen\u00e9tica.1995 2 ed. Bras\u00edlia, DF: EMBRAPA-CENARGEN. 220pp.<\/p>\n\n\n\n

GOLDSTEIN, B.D. & SCHLOTTERER, C. Microsatellites : Evolution and Applications. Oxford University Press, pp 352. 2001.<\/p>\n\n\n\n

JACOB, H.J., Lindpaintner, K., Lincoln, S.E., Kusumi, K., Bunker, R.K., Mao, Y.P., Ganten, D., Dzau, V.J., Lander, E.S. (1991). Genetic mapping of a gene causing hypertension in the stroke-prone spontaneously hypertensive rat. Cell 67: 213-24<\/p>\n\n\n\n

T\u00d3TH,G., G\u00e1spari, Z., Jurka, J (2000). Microssatelites in different eukaryotic genomes: survey and analysis. Genome Res. 10: 967-81.<\/p>\n\n\n\n

Tabela 1. Dados sobre os 12 locos microssat\u00e9lites (SSR) de Manilkara huberi selecionados para os estudos populacionais. Temperatura de anelamento (Ta), n\u00famero de indiv\u00edduos analisados (N), n\u00famero total de alelos (A), heterozigosidade esperada (He); e heterozigosidade observada(Ho).<\/p>\n\n\n\n

1Bi\u00f3loga, bolsista, Embrapa Recursos Gen\u00e9ticos e Biotecnologia, FUNTEC\/IBAMA\/DFID.<\/p>\n\n\n\n

2Bi\u00f3loga, mestranda, UFPA, Embrapa Recursos Gen\u00e9ticos e Biotecnologia.<\/p>\n\n\n\n

3Bolsista, Embrapa Recursos Gen\u00e9ticos e Biotecnologia, FUNTEC\/IBAMA\/DFID.<\/p>\n\n\n\n

4Bi\u00f3loga, PhD, Embrapa Recursos Gen\u00e9ticos e Biotecnologia – aciampi@cenargen.embrapa.br<\/p>\n\n\n\n

V\u00e2nia.Cristina.Renn\u00f3 Azevedo1
\nChristina Cl\u00e9o Vinson.2
\nValci Pereira da Silva3
\nAna Yamaguichi Ciampi.4 <\/em><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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